Kit ELISA IgG anti-HPV humain

 

 

 

Référence produit : YP-W12159
Conditionnement : 96T

Plage de détection de performance du kit :  20 UI/mL – 640 UI/mL.

Sensibilité : La dose minimale détectée est inférieure à 1,0 UI/mL.

Précision : Le coefficient de variation intra-série (CV%) est inférieur à 10 % ; le coefficient de variation inter-série (CV%) est inférieur à 15 %.

Taux de récupération : Le taux de récupération est compris entre 85 % et 115 %.

Spécificité : Ce kit reconnaît les HPV-IgG humains naturels et recombinants  （HPV-IgG） sans réaction croisée avec des analogues structuraux.

Stabilité : Stockage à 2℃-8℃, valable 6 mois.

Utilisation : Utilisé pour détecter la concentration d'HPV-IgG humain  （HPV-IgG） dans des échantillons tels que le sérum, le plasma, le surnageant de culture cellulaire et les tissus.

Durée de conservation : 2℃-8℃, valable 6 mois.

 

Principe expérimental

Le kit utilise une méthode ELISA (dosage immuno-enzymatique) indirecte. Dans les microplaques pré-enrobées d'antigène de capture des HPV-IgG humains  （HPV-IgG）, l'échantillon à tester et le produit standard sont ajoutés tour à tour, puis l'anticorps de détection marqué à la HRP est ajouté, incubé et minutieusement lavé. Les substrats A et B sont ajoutés, et le substrat produit un produit bleu sous la catalyse de la HRP, qui est finalement converti en jaune sous l'action d'une solution d'arrêt (solution acide). L'absorbance (valeur DO) a été mesurée à une longueur d'onde de 450 nm sur le lecteur de microplaques, et l'absorbance (valeur DO) était positivement corrélée à la concentration d'HPV-IgG humain  （HPV-IgG） dans l'échantillon à tester. En ajustant la courbe d'étalonnage, la concentration d'HPV-IgG humain  （HPV-IgG） dans l'échantillon peut être calculée.

 

 

Composants du kit et stockage Les kits non ouverts sont conservés à 2-8 degrés et les kits périmés ne doivent pas être utilisés.

Les concentrations des calibrateurs sont respectivement : 640, 320, 160, 80, 40, 20 UI/mL.

 

 

 

 

 

 

Note :

 

1 : Avant toute utilisation, veuillez vérifier si l'étiquette et la quantité de réactif dans le kit correspondent au tableau.
2 : Si les composants du kit doivent être réutilisés, veuillez vous assurer qu'ils ne sont pas contaminés après la dernière utilisation. 3 : La plaque enzymatique n'a pas été utilisée en une seule fois. N'oubliez pas de la sceller et de la conserver à 2-8°C.

 

Équipement de test requis (non fourni, mais une assistance à l'achat est possible)

 

1) Lecteur de microplaques capable de détecter une absorbance de 450 nm

2) Pipette et pointes, réservoir pour distribution d'échantillons

3) Étuve à température constante à 37°C ou bain-marie

4) Tubes à essai, tubes à centrifuger, éprouvettes graduées, etc. pour la préparation des réactifs

5) Eau distillée ou déionisée

6) Agitateur vortex, agitateur de microplaques

 

Notes

 

1) Réservé à la recherche scientifique uniquement, ne doit pas être utilisé pour un diagnostic clinique.
2) À utiliser dans la période de validité indiquée sur le kit ; ne pas utiliser de produits périmés.

3) Ne pas mélanger avec des kits ou des composants d'autres fabricants ; utiliser le diluant d'échantillon fourni avec le kit.

4) Si la valeur de l'échantillon est supérieure à la concentration standard la plus élevée, veuillez diluer l'échantillon de manière appropriée avant de procéder à une nouvelle mesure.

5) Les anticorps hétérophiles tels que les anticorps anti-souris humains présents dans l'échantillon à tester interféreront avec les résultats. Veuillez éliminer ce facteur avant le test.

6) Les résultats obtenus par d'autres méthodes ne sont pas directement comparables à ceux obtenus avec ce kit.

7) Veuillez porter une blouse de laboratoire et des gants en latex pour vous protéger pendant le test. En particulier lors de l'analyse d'échantillons de sang ou d'autres fluides corporels, veuillez respecter les réglementations nationales en matière de sécurité biologique en laboratoire.

8) Incuber strictement selon le temps et la température prescrits pour garantir des résultats précis. Tous les réactifs doivent être à température ambiante (20-25°C) avant utilisation. Remettre au réfrigérateur immédiatement après usage.

9) Un lavage incorrect de la plaque peut entraîner des résultats inexacts. Assurez-vous d'aspirer le liquide dans les puits autant que possible avant d'ajouter le substrat. Ne laissez pas les micro-puits sécher pendant l'incubation.

10) Éliminez tout liquide résiduel et toute empreinte digitale sur le fond de la plaque, faute de quoi la valeur de DO (densité optique) sera affectée.

11) Le substrat chromogène doit être incolore ou très clair.

12) Évitez la contamination croisée des réactifs et des échantillons afin d'éviter des résultats erronés.

13) Évitez l'exposition directe à une lumière intense pendant le stockage et l'incubation.

14) Le lecteur de microplaques utilisé doit être équipé d'un filtre capable de détecter des longueurs d'onde de 450±10 nm, avec une plage de densité optique comprise entre 0 et 3,5. Il est recommandé de le laisser chauffer 15 minutes à l'avance.

15) Le tube EP et la pointe utilisés pour le test sont à usage unique ; il est strictement interdit de les mélanger.

 

Préparation et conservation des échantillons

Les directives suivantes ne sont que des indications générales pour la collecte et la conservation des échantillons. Lors de la collecte et du stockage de tous les échantillons, l'azide de sodium ne doit pas être utilisé comme conservateur. Si l'échantillon n'est pas analysé immédiatement, il doit être aliquoté, congelé et conservé en évitant les cycles de congélation-décongélation répétés.

 

Surnageant de culture cellulaire - centrifugez pour éliminer le précipité, analysez immédiatement ou aliquotez et conservez congelé à -20°C.

 

Sérum - Recueillez le sang dans un tube à essai propre, laissez coaguler à température ambiante pendant 30 minutes, centrifugez à 2000×g pendant 20 minutes et recueillez le sérum. Analysez immédiatement ou aliquotez et conservez congelé à -20°C.

 

Plasma - Utilisez de l'héparine, du citrate ou de l'EDTA comme anticoagulant, et centrifugez à 2-8°C à 2000×g pendant 20 minutes dans les 30 minutes suivant la prise de sang. Pour éliminer les effets des plaquettes, il est recommandé de centrifuger à nouveau à 2-8°C à 10 000×g pendant 10 minutes. Analysez immédiatement ou aliquotez et conservez par congélation à -20°C.

 

Lysat cellulaire - Pour les cellules adhérentes, éliminez le milieu de culture et lavez avec du PBS, du sérum physiologique ou un milieu de culture sans sérum. Ajoutez une quantité appropriée de lysat et homogénéisez à l'aide d'une pipette pour assurer un contact total entre le lysat et les cellules. Habituellement, la lyse intervient après 10 secondes. Pour les cellules en suspension, recueillez les cellules par centrifugation et lavez-les avec du PBS, du sérum physiologique ou un milieu de culture sans sérum. Ajoutez une quantité appropriée de lysat, homogénéisez avec la pipette et tapotez avec les doigts pour lyser complètement les cellules. Après une lyse suffisante, centrifugez à 10 000-14 000×g pendant 3-5 minutes et éliminez le surnageant. Analysez immédiatement ou aliquotez et conservez par congélation à -20°C.

 

Homogénat de tissu - Rincez le tissu avec du PBS pré-refroidi (0,01M, pH=7,4) pour éliminer le sang résiduel (les globules rouges lysés dans l'homogénat affecteront les résultats), puis coupez le tissu après pesée. Placez le tissu découpé avec le volume correspondant de PBS (généralement dans un rapport poids/volume de 1:9, par exemple 1g d'échantillon de tissu pour 9mL de PBS ; le volume spécifique peut être ajusté selon les besoins expérimentaux ; il est recommandé d'ajouter des inhibiteurs de protéases au PBS) dans un homogénéiseur en verre et broyez soigneusement sur glace. Pour lyser davantage les cellules tissulaires, l'homogénat peut être soumis aux ultrasons ou à plusieurs cycles de congélation-décongélation. Enfin, centrifugez l'homogénat à 5000×g pendant 5 à 10 minutes et prélevez le surnageant pour le test.

 

Urine – collectez dans un tube stérile et centrifugez à 2000×g pendant 20 minutes. Prélevez soigneusement le surnageant. Si un précipité se forme, centrifugez à nouveau.

Préparation des réactifs

 

1. Avant utilisation, tous les composants doivent être réchauffés pendant au moins 60 minutes pour assurer un retour total à température ambiante.

2. Solution de lavage concentrée : La solution concentrée conservée au réfrigérateur peut présenter des cristaux, ce qui est un phénomène normal. Les cristaux se dissolvent complètement par chauffage au bain-marie. Diluez la solution de lavage concentrée avec de l'eau distillée dans un rapport de 1:20 (1 part de solution concentrée pour 19 parts d'eau distillée).

3. Substrat : mélangez soigneusement les solutions de substrat A et B dans un volume de 1:1 avant utilisation, et utilisez le mélange dans les 15 minutes.

 

Procédures opératoires : Laissez tous les réactifs et composants revenir à température ambiante ; il est recommandé de réaliser des doublons.

 

1. Préparez la solution de travail pour chaque composant du kit selon la méthode décrite dans les instructions précédentes.
2. Retirez les barrettes nécessaires du sachet en aluminium, scellez les barrettes restantes avec un sachet refermable et replacez-les au réfrigérateur.

3. Préparer les puits de gamme étalon et les puits d'échantillons, et ajouter 50 μL de gamme étalon de différentes concentrations dans chaque puits de gamme étalon ;

4. Ajouter 50 μL de l'échantillon à tester dans le puits d'échantillon ; ne rien ajouter dans le puits blanc.

5. À l'exception des puits blancs, ajouter 100 μL d'anticorps de détection marqué à la peroxydase de raifort (HRP) dans chaque puits de gamme étalon et puits d'échantillon, sceller les puits de réaction avec un film adhésif, et incuber pendant 60 minutes au bain-marie à 37 °C ou dans une étuve à température constante.

6. Éliminer le liquide, sécher par tamponnement sur du papier absorbant, remplir chaque puits avec la solution de lavage (350 μL), laisser reposer pendant 1 minute, secouer pour éliminer la solution de lavage, sécher par tamponnement sur du papier absorbant, et répéter le lavage de la plaque 5 fois (il est également possible d'utiliser un laveur de plaques automatique).

(Conseil : Pour obtenir des résultats expérimentaux idéaux, le liquide résiduel doit être complètement éliminé. Après le lavage de la plaque, veuillez effectuer l'étape suivante immédiatement et ne pas laisser la microplaque sécher.)

7. Ajouter 50 μL de substrat A et B dans chaque puits, et incuber à 37 °C pendant 15 minutes à l'abri de la lumière.
8. Ajouter 50 μL de solution d'arrêt dans chaque puits, et dans les 15 minutes, déterminer la valeur de DO de chaque puits à une longueur d'onde de 450 nm.

 

Calcul des résultats

 

1.        Utiliser la concentration de la substance standard comme abscisse et l'absorbance correspondante (valeur DO) comme ordonnée. Utiliser un logiciel informatique et un ajustement de courbe logistique à quatre paramètres (4-pl) pour créer une équation de courbe standard. Grâce à l'absorbance (valeur DO) de l'échantillon, utiliser l'équation pour calculer la concentration de l'échantillon. [Calculer à l'aide du logiciel ELISA Calc. Il est recommandé d'utiliser un ajustement à quatre paramètres pour la courbe standard, mais ce n'est pas la seule méthode d'ajustement]

2.        Si l'échantillon est dilué, la concentration mesurée par la méthode ci-dessus doit être multipliée par le facteur de dilution pour déterminer la concentration finale de l'échantillon. Note : Les expérimentateurs doivent établir une courbe standard basée sur leurs propres expériences. Pour chaque test, une courbe standard doit être établie pour chaque plaque enzymatique. Les courbes suivantes sont données à titre indicatif uniquement !